Ontwikkeling van een serologische test voor tuberculose

Antigens secreted by M. tuberculosis in the culture medium and antigens obtained from sonicated M. tuberculosis were characterized, at the laboratory of Tropical Hygiene of the Royal Tropical Institute and the division of Pulmonary Medicine at the Academic Medical Centre, in order to explore which antigens could be valuable in the development of a serological test for tuberculosis. Using murine monoclonal antibodies in immunoblot, a pattern of protein bands distinct from that of the corresponding M. tuberculosis sonicate was found in the culture medium. The major protein bands of the culture medium, of 24 and 12 kD, and the major protein band of 16 kD in sonicate were purified. These antigens were tested in ELISA with sera from 20 patients with tuberculosis, diagnosed by a positive culture of M. tuberculosis, and from 21 control subjects. The ELISA results obtained with these 3 antigens were combined and the mean value obtained in the control group plus 2 times the standard deviation was chosen as the cut-off level. Sixteen of the 20 patients with tuberculosis had antibodies against 1 of the purified antigens, while none of the control subjects had. By combining the results, obtained with these 3 antigens, 17 of the 20 patients with tuberculosis were positive in this serological test and none of the control subjects. The 24, 12 and 16 kD antigens may be valuable for the development of a serological test for tuberculosis.

Samenvatting

Op het laboratorium voor Tropische Hygiëne van het Koninklijk Instituut voor de Tropen en de afdeling Longziekten van het Academisch Medisch Centrum werden antigenen, uitgescheiden door M. tuberculosis in kweekmedium en verkregen uit sonicaat (door ultrasone trilling in oplossing gebracht) van M. tuberculosis, gekarakteriseerd om te bepalen welke antigenen van waarde zouden kunnen zijn bij de ontwikkeling van een serologische test voor tuberculose. Bij gebruik van monoklonale antistoffen op een immunoblot werd in kweekmedium een patroon van eiwitbanden gevonden dat duidelijk verschilde van het patroon in sonicaat van M. tuberculosis. De duidelijke eiwitbanden in het kweekmedium van 24 en 12 kD en een eiwit van 16 kD, een belangrijk antigeen in sonicaat van M. tuberculosis, werden met gelpermeatie-chromatografie onder hoge druk gezuiverd. De 3 antigenen werden in een ELISA getest met sera van 20 patiënten met tuberculose, bij wie de diagnose door kweken gesteld was, en sera van 21 controlepersonen. De ELISA-resultaten verkregen met deze 3 antigenen werden gecombineerd en als grenswaarde werd de gemiddelde waarde plus 2 maal de standaarddeviatie van de controlegroep genomen. Van de 20 patiënten met tuberculose hadden 16 patiënten antistoffen tegen 1 van de gezuiverde antigenen en geen van de controlepersonen. Na combinatie van de ELISA-resultaten van deze antigenen waren 17 van de patiënten met tuberculose positief in deze serologische test en geen van de controlepersonen. Antigenen van 24, 12 en 16 kD kunnen nuttig zijn bij de verdere ontwikkeling van een serologische test voor tuberculose.